Характеризація очищеної рекомбінантної субодиниці В дифтерійного токсину як інструмента його дослідження
DOI:
https://doi.org/10.15407/dopovidi2017.02.088Ключові слова:
cубодиниця В, іонні канали, бішарові ліпідні мембрани, дифтерійний токсин, СRM197Анотація
Очищення препаратів рекомбінантної субодиниці В (SbB) дифтерійного токсину (DT), синтезованої в цитоплазмі, периплазмі і нерозчинних тільцях включення клітин Escherichia coli, проведене за допомогою металоафінної хроматографії після руйнування бактеріальної ДНК та клітинної стінки ензимами, дало можливість позбутися домішок ендогенних пороформуючих протеїнів. Показано, що рекомбінантні похід ні DT, SbB та CRM197 мають однакову спорідненість з рецепторами чутливих та резистентних до токсину клітин ліній Vero і L929 відповідно. Прикладання позитивного потенціалу з боку додавання SbВ (0,3 мкг/мл) до фосфатидилетаноламінвмісної бішарової мембрани у розчині 1 M KCl (pH 4,8) призводить до утворен ня потенціалозалежних іонних каналів з провідністю 20 пСм, як показано у класичних дослідженнях природ ного DT. За даними порівняльного аналізу, характеристики утворення і функціону вання каналів DT найкраще відтворюються SbB, синтезованою в неактивній формі у вигляді тілець включення, та ренатурованою in vitro.
Завантаження
Посилання
Manoilov, K. Yu., Gorbatiuk, O. B., Usenko, M. O., Schatursky, O. Ya., Borisova, T. O., Kolybo, D. V. (2016). Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, No 9, pp. 124-133 (in Ukr ai nian). https://doi.org/10.15407/dopovidi2016.09.124
Kaberniuk, A. A., Oliinyk, O. S., Redchuk, T. A., Romaniuk, S. I., Kolybo, D. V., Komisarenko, S. V. (2008). Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, No 3, pp. 160-166 (in Ukrainian).
Glover, D. M., Hames, B. D. (1999). DNA Cloning: A Practical Approach, Vol. 2, Expression Systems, Oxford: Oxford Univ. Press,
Mather, S. J. (1996). Current Directions in Radiopharmaceutical Research and Development, Dordrecht: Springer. https://doi.org/10.1007/978-94-009-1768-2
Abraham, J. A., Damm, D., Bajardi, A., Miller, J., Klagsbrun, M., Ezekowitz, R. A. (1993). Biochem. Biophys. Res. Commun., 190, pp.125-133. https://doi.org/10.1006/bbrc.1993.1020
Donovan, J. J., Simon, M. I., Draper, R. K., Montal, M. (1981). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78, No 1, pp. 172-176. https://doi.org/10.1073/pnas.78.1.172
Senzel, L., Huynh, P. D., Jakes, K. S., Collier, R. J., Finkelstein, A. (1998). J. Gen. Physiol., 112, pp. 317-324. https://doi.org/10.1085/jgp.112.3.317
Kagan, B. L., Reich, K. A., Collier, R. J. (1984). Biophys J., 45, pp. 102-104. https://doi.org/10.1016/S0006-3495(84)84126-0
Shatursky, O. Ya., Kasatkina, L. A., Rodik, R. V., Cherenok, S. O., Shkrabak, A. A., Veklich, T. O., Borisova, T. A., Kosterin, S. O., Kalchenko, V. I. (2014). Org. Biomol. Chem., 12, pp. 9811-9821. https://doi.org/10.1039/C4OB01886A
Hoch, D. H., Romero-Mira, M., Ehrlich, B. E., Finkelstein, A., DasGupta, B. R., Simpson, L. L. (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 82, pp. 1692-1696. https://doi.org/10.1073/pnas.82.6.1692
Proia, R. L., Wray, S. K., Hart, D. A., Eidels, L. (1980). J. Biol. Chem., 255, pp. 12025-12033.
Dukhovlinov, I. V., Fedorova, E. A., Bogomolova, E. G., Dobrovolskaya, O. A., Chernyaeva, E. N., Al-Shekhadat, R. I., Simbirtsev, A. S. (2015). Rus. J. Infection and Immunity, 5, No 1, pp. 37-44 (in Russian).
Papini, E., Sandoná, D., Rappuoli, R., Montecucco, C. (1988). EMBO J., 7, pp. 3353-3359.
Misler, S. (1984). Biophys J., 45, pp. 107-109. https://doi.org/10.1016/S0006-3495(84)84128-4
Chanturia, A. N., Shatursky, O. Ya., Lishko, V. K., Monastyrnaya, M. M., Kozlovskaya, E. P. (1990). Biol. Membrany, 7, pp. 763-769 (in Russian).
##submission.downloads##
Опубліковано
Як цитувати
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2024 Доповіді Національної академії наук України
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.
