РНК-зв’язувальний білок SAM68 взаємодіє із білками ендоцитозу та модуляторами актинового цитоскелета

Автор(и)

  • С.В. Паньківський Інститут молекулярної біології і генетики
  • Н.В. Сенченко Інститут молекулярної біології і генетики
  • П.Б. Бусько Інститут молекулярної біології і генетики
  • А.В. Риндич Інститут молекулярної біології і генетики

DOI:

https://doi.org/10.15407/dopovidi2020.05.103

Ключові слова:

ITSN1, SAM68, SRSF1, альтернативний сплайсинг

Анотація

Метою дослідження було підтвердити можливість прямого зв’язування між SAM68 та ITSN1, проаналізувати вплив ITSN1 на SAM68-опосередкований альтернативний сплайсинг і виявити нових партнерів SAM68 з-поміж ендоцитозних білків та модуляторів реорганізації актинового цитоскелета. Взаємодії проаналізовано за допомогою pull-down методик з використанням очищених рекомбінантних білків або лізатів клітин 293. Нокдаун ITSN1 у клітинах лінії HeLa проводили, використовуючи дві шпилькові РНК. Експресію ізоформ, що утворюються в ході альтернативного сплайсингу, проаналізовано за допомогою ПЛР в реальному часі. Показано, що SAM68 прямо взаємодіє з ITSN1 in vitro. Далі виявлено, що нокдаун ITSN1 у клітинах лінії HeLa підвищує рівень збереження інтрону 3 SRSF1 на 50 %, сприяючи експресії протоонкогенної ізоформи SRSF1. Встановлено, що SH3 домени білків AMPH1, BIN1, CTTN1, TKS4 та TKS5 преципітують SAM68 із лізатів клітин 293. SAM68 безпосередньо зв’язується з ITSN1 і взаємодіє з ендоцитозними білками та модуляторами перебудов актинового цитоскелета, а SAM68-опосередкований сплайсинг у клітинах лінії HeLa може регулюватися ITSN1.

Завантаження

Посилання

Sanchez-Jimenez, F. & Sanchez-Margalet, V. (2013). Role of Sam68 in post-transcriptional gene regulation. Int. J. Mol. Sci., 14, No. 12, pp. 23402-23419. Doi: https://doi.org/10.3390/ijms141223402

Frisone, P., Pradella, D., Di Matteo, A., Belloni, E., Ghigna, C. & Paronetto, M. P. (2015). SAM68: Signal Transduction and RNA Metabolism in Human Cancer. Biomed. Res. Int., 2015, 528954. Doi: https://doi.org/10.1155/2015/528954

Najib, S., Martin-Romero, C., Gonzalez-Yanes, C. & Sanchez-Margalet, V. (2005). Role of Sam68 as an adaptor protein in signal transduction. Cell. Mol. Life Sci., 62, No. 1, pp. 36-43. Doi: https://doi.org/10.1007/s00018-004-4309-3

Asbach, B., Ludwig, C., Saksela, K. & Wagner, R. (2012). Comprehensive analysis of interactions between the Src-associated protein in mitosis of 68 kDa and the human Src-homology 3 proteome. PLoS One, 7, No. 6, e38540. Doi: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0038540

Pankivskyi, S., Senchenko, N., Busko, P. & Rynditch, A. (2019). Scaffold proteins ITSN1 and ITSN2 interact with nuclear RNA-binding proteins. Вiopolymers and Cell, 35, No. 2, pp. 81-90. Doi: https://doi.org/10.7124/bc.000999

Herrero-Garcia, E. & O’Bryan, J. P. (2017). Intersectin scaffold proteins and their role in cell signaling and endocytosis. Biochim. Biophys. Acta. Mol. Cell. Res., 1864, No. 1, pp. 23-30. Doi: https://doi.org/10.1016/j.bbamcr.2016.10.005

Alvisi, G., Paolini, L., Contarini, A., Zambarda, C., Di Antonio, V., Colosini, A., & Radeghieri, A. (2018). Intersectin goes nuclear: secret life of an endocytic protein. Biochem. J., 475, No. 8, pp. 1455-1472. Doi: https://doi.org/10.1042/BCJ20170897

Moffat, J., Grueneberg, D. A., Yang, X., Kim, S. Y., Kloepfer, A. M., Hinkle, G. & Root, D. E. (2006). A lentiviral RNAi library for human and mouse genes applied to an arrayed viral high-content screen. Cell, 124, No. 6, pp. 1283-1298. Doi: https://doi.org/10.1016/j.cell.2006.01.040

Livak, K. J. & Schmittgen, T. D. (2001). Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods, 25, No. 4, pp. 402-408. Doi: https://doi.org/10.1006/meth.2001.1262

Das, S. & Krainer, A. R. (2014). Emerging functions of SRSF1, splicing factor and oncoprotein, in RNA metabolism and cancer. Mol. Cancer Res., 12, No. 9, pp. 1195-1204. Doi: https://doi.org/10.1158/1541-7786.MCR-14-0131

Lareau, L. F., Inada, M., Green, R. E., Wengrod, J. C. & Brenner, S. E. (2007). Unproductive splicing of SR genes associated with highly conserved and ultraconserved DNA elements. Nature, 446, No. 7138, pp. 926-929. Doi: https://doi.org/10.1038/nature05676

Valacca, C., Bonomi, S., Buratti, E., Pedrotti, S., Baralle, F. E., Sette, C. & Biamonti, G. (2010). Sam68 regulates EMT through alternative splicing-activated nonsense-mediated mRNA decay of the SF2/ASF proto-oncogene. J. Cell Biol., 191, No. 1, pp. 87-99. Doi: https://doi.org/10.1083/jcb.201001073

Jeganathan, N., Predescu, D., Zhang, J., Sha, F., Bardita, C., Patel, M. & Predescu, S. (2016). Rac1-mediated cytoskeleton rearrangements induced by intersectin-1s deficiency promotes lung cancer cell proliferation, migration and metastasis. Mol. Cancer, 15, No. 1, 59. Doi: https://doi.org/10.1186/s12943-016-0543-1

Bardita, C., Predescu, D. N., Sha, F., Patel, M., Balaji, G. & Predescu, S. A. (2015). Endocytic deficiency induced by ITSN-1s knockdown alters the Smad2/3-Erk1/2 signaling balance downstream of Alk5. J. Cell. Sci., 128, No. 8, pp. 1528-1541. Doi: https://doi.org/10.1242/jcs.163030

Carman, P. J. & Dominguez, R. (2018). BAR domain proteins-a linkage between cellular membranes, signaling pathways, and the actin cytoskeleton. Biophys. Rev., 10, No. 6, pp. 1587-1604. Doi: https://doi.org/10.1007/s12551-018-0467-7

##submission.downloads##

Опубліковано

28.03.2024

Як цитувати

Паньківський, С. ., Сенченко, Н. ., Бусько, П. ., & Риндич, А. . (2024). РНК-зв’язувальний білок SAM68 взаємодіє із білками ендоцитозу та модуляторами актинового цитоскелета . Доповіді Національної академії наук України, (5), 103–109. https://doi.org/10.15407/dopovidi2020.05.103

Номер

№ 5 (2020): Доповіді Національної академії наук України

Розділ

Біологія

Ліцензія

Авторське право (c) 2023 Доповіді Національної академії наук України

Creative Commons License

Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.